Inducción de la producción de óxido nítrico por lipopolisacárido de «Brucella» en macrófagos de rata

Las brucelas son bacterias intracelulares facultativas, capaces de sobrevivir y multiplicarse en el interior de diversas células, incluyendo los macrófagos. Su virulencia y tendencia a producir infecciones crónicas se cree que es debida a su capacidad para resistir los mecanismos bactericidas intracelulares, entre los que se encuentra la producción de óxido nítrico (NO). Teniendo en cuenta que el lipopolisacárido liso (S- LPS) de las brucelas ha sido propuesto como factor de virulencia de la mismas y que la mayoría de efectos biológicos del LPS se asocian al lípido A (LípA), nos planteamos como objetivo de esta tesis comprobar si los S-LPS y LípA de Brucella inducían la producción de NO en los macrófagos peritoneales de rata, comparando su efecto con el del LPS y LípA de Escherichia coli. Mostramos como los S-LPS de Brucella abortus 544 y Brucella melitensis 16 M son capaces de inducir la producción de NO por los macrófagos peritoneales de rata de forma dependiente del tiempo y de la dosis. La producción de NO ocurre a través de la vía de la L-arginina, a juzgar por su dependencia de la presencia de L-arginina y el bloqueo por N^G-metil-L-arginina, un inhibidor de las sintasas de NO. La participación de la isoforma inducible de la NO sintasa (iNOS) en la producción de NO iniciada por ambos S-LPS, se demuestra por la inducción de la expresión de ARN mensajero y de la proteína iNOS. Los LípA de Brucella también inducen la producción de NO, de forma dependiente de la dosis, y la expresión de ARNm de iNOS, comportándose como la parte activa del S-LPS en dicha inducción. No encontramos diferencias significativas en cuanto a las cantidades de NO que pueden llegar a producirse por los S-LPS de ambas especies de Brucella, ni tampoco en lo que se refiere a las cantidades producidas por sus LípA, sin embargo a bajas concentraciones, 0.01-0.1 mg/ml, se  comportan como  inductores menos  potentes que el LPS y LípA de Escherichia coli. Además mostramos como los lipopolisacáridos de Escherichia hermannii, Yersinia enterocolitica O:9, Pseudomonas maltophilia 555 y Ochrobactrum anthropi LMG3331, que presentan reacciones serológicas cruzadas con los S-LPS de Brucella, son capaces de inducir la producción de NO y la expresión de ARNm de iNOS en macrófagos peritoneales de rata. Nuestras observaciones podrían ayudar a explicar el curso agudo de la infección por brucelas en los ratones, la baja frecuencia con que se presenta el cuadro de shock séptico en la brucelosis humana y la prolongada supervivencia intracelular de Brucella en los humanos.